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2018年4月28日，由我院生物研究所承擔(dān)的《核酸檢測(cè)關(guān)鍵技術(shù)與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)研究》項(xiàng)目在第三方專業(yè)科技成果評(píng)價(jià)機(jī)構(gòu)——四川省技術(shù)市場(chǎng)協(xié)會(huì)的組織下，按照科技成果評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)及程序，本著科學(xué)、獨(dú)立、客觀、公正的原則，對(duì)項(xiàng)目科技成果進(jìn)行了評(píng)價(jià)。
該項(xiàng)目經(jīng)歷了3個(gè)“五年計(jì)劃”，相關(guān)技術(shù)成果受到了包括4個(gè)國(guó)家科技支撐計(jì)劃、3個(gè)質(zhì)檢公益性行業(yè)科研專項(xiàng)和4個(gè)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目在內(nèi)的11個(gè)國(guó)家級(jí)項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)支持。主要貢獻(xiàn)如下：
1.針對(duì)加工產(chǎn)品、珍稀樣本、DNA量非常少的樣本、復(fù)雜背景樣本等采用現(xiàn)有方法進(jìn)行核酸制備難度大，方法穩(wěn)定性和重復(fù)性差，質(zhì)量達(dá)不到要求的問題，本項(xiàng)目研究建立了微量核酸提取純化方法，該方法采用了“加離液劑或表面活性劑進(jìn)行充分混勻，溫浴消化”的樣品前處理方式，參照GB/T 33410和GB/T 34794的要求，優(yōu)選蛋白酶K、瓊脂糖凝膠回收試劑盒，確定微量核酸制備的消化條件和回收程序。方法靈敏度高，穩(wěn)定性和重復(fù)性佳。
2.針對(duì)現(xiàn)有核酸濃度純度檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性對(duì)受檢核酸樣本的純度和濃度影響較大，方法適用性有限，方法誤差較大的問題，本項(xiàng)目研究建立了水溶液中核酸濃度和純度檢測(cè)方法。該方法根據(jù)核酸濃度范圍，濃度由高到低分別采用了紫外吸收法、熒光分析法、瓊脂糖凝膠電泳法以及熒光定量PCR法測(cè)定核酸濃度純度。并采用上述4種方法對(duì)基因組DNA、微量cfDNA或ctDNA、微量病毒DNA等不同類型的DNA樣本進(jìn)行了方法的適用性考察，實(shí)驗(yàn)結(jié)果達(dá)到預(yù)期效果。方法適用性強(qiáng)，靈敏度高，穩(wěn)定性和重復(fù)性好。
3.針對(duì)現(xiàn)有實(shí)時(shí)熒光PCR方法的可靠性和重復(fù)性得不到保障，結(jié)果不準(zhǔn)確的問題，建立了實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)定量檢測(cè)DNA的方法，該方法通過加標(biāo)回收技術(shù)，添加不同濃度水平的參考DNA測(cè)定回收率，確定實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)條件；參照GB/T 34797和GB/T 34776的要求，優(yōu)選引物探針、工具酶，確定實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)體系，方法檢出限低，穩(wěn)定性和重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高。
4.通過對(duì)吸附柱的最大上樣量、吸附柱的承載量、DNA回收產(chǎn)物質(zhì)量、回收片段范圍、回收率等關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)的測(cè)定研究。建議了柱式瓊脂糖凝膠回收試劑盒的指標(biāo)要求，并建立了柱式瓊脂糖凝膠回收試劑盒性能指標(biāo)檢測(cè)方法。
5.通過對(duì)核酸引物探針的總量、純度、相對(duì)分子量、堿基準(zhǔn)確性、探針修飾基團(tuán)準(zhǔn)確性、擴(kuò)增性能（特異性、產(chǎn)物大小、引物二聚體）等重要性能指標(biāo)進(jìn)行研究，建議了引物探針的質(zhì)量技術(shù)要求，建立了核酸引物探針檢測(cè)方法。
6.首次制定了《GB/T 34794-2017瓊脂糖凝膠回收試劑盒測(cè)定通則》、《GB/T 34776-2017 T4 DNA連接酶酶活及雜質(zhì)檢測(cè)方法》、《GB/T 34797-2017核酸引物探針質(zhì)量技術(shù)要求》、《GB/T 34796-2017水溶液中核酸的濃度和純度檢測(cè)紫外分光光度法》4項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。
評(píng)價(jià)專家組一致認(rèn)為：項(xiàng)目成果填補(bǔ)多項(xiàng)國(guó)內(nèi)空白，整體處于國(guó)內(nèi)領(lǐng)先水平，其中建立的核酸引物探針和瓊脂糖凝膠回收試劑盒評(píng)價(jià)要求和檢測(cè)方法達(dá)到國(guó)際先進(jìn)水平。相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施和技術(shù)成果的廣泛應(yīng)用對(duì)規(guī)范和促進(jìn)生物產(chǎn)業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展，推進(jìn)國(guó)家重大科學(xué)研究計(jì)劃、國(guó)家重要標(biāo)準(zhǔn)制修訂和順利實(shí)施起到了關(guān)鍵性支撐作用，成果具有顯著的社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益。
