經(jīng)過(guò)多年技術(shù)攻關(guān),我院生物研究所研制完成“致瀉大腸埃希氏菌質(zhì)粒DNA系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”和“動(dòng)物源性基因組DNA系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”共計(jì)13種生物領(lǐng)域國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),并取得國(guó)家二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定級(jí)證書(shū)。該系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可用于生物測(cè)量量值溯源、定性定量檢測(cè)、實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制和人員考核等,為我國(guó)食品安全檢驗(yàn)檢測(cè)和風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)提供了有力的技術(shù)支撐。
致瀉大腸埃希氏菌主要指一類能引起人體以腹瀉癥狀為主的大腸埃希氏菌。生物所針對(duì)致瀉大腸檢驗(yàn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)匱乏的問(wèn)題,攻關(guān)研制了志賀毒素Ⅱ基因(stx2)、蛋白分泌物調(diào)節(jié)基因(escV)、熱不穩(wěn)定性腸毒素基因(lt)、集聚黏附菌毛調(diào)節(jié)基因(aggR)、集聚熱穩(wěn)定性毒素A基因(astA)、腸定植因子基因(pic)等6種常見(jiàn)毒力基因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。該系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可在-20℃存儲(chǔ)條件下穩(wěn)定24個(gè)月,主要配套國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 4789.6-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 致瀉大腸埃希氏菌檢驗(yàn)》使用。
肉類源性成分鑒別已成為世界各國(guó)關(guān)注度較高的熱點(diǎn)問(wèn)題。生物研究所針對(duì)動(dòng)物源標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研發(fā)相對(duì)滯后,無(wú)法滿足動(dòng)物源檢驗(yàn)檢測(cè)需求的難題,攻關(guān)研制了豬源性ATP8基因、鴨源性cytb基因、綿羊源性cytb基因、牦牛源性cytb基因、雞源性ND1基因、黃牛源性cytb基因、鵝源性16S rRNA基因等7種動(dòng)物源性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。該系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)同樣可在-20℃存儲(chǔ)條件下穩(wěn)定24個(gè)月,主要配套GB/T 21101-2007《動(dòng)物源性飼料中豬源性成分定性檢測(cè)方法 PCR法》、GB/T 25165-2010《明膠中牛、羊、豬源性成分的定性檢測(cè)方法 實(shí)時(shí)熒光PCR法》、GB/T 38164-2019《常見(jiàn)畜禽動(dòng)物源性檢測(cè) 實(shí)時(shí)熒光PCR法》、SN/T 2557-2010《畜肉食品中牛成分定性檢測(cè)方法 實(shí)時(shí)熒光PCR法》、SN/T 3730《食品及飼料中常見(jiàn)畜類品種的鑒定方法》、NY/T 1946-2010《飼料中牛羊源性成分檢測(cè) 實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)法》等系列標(biāo)準(zhǔn)使用。
表1. 13種生物領(lǐng)域國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信息一覽表
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)名稱 | 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)編號(hào) | 基因拷貝數(shù)濃度(copies/μL) | 擴(kuò)展不確定度(copies/μL,k=2) |
腸道集聚性大腸埃希氏菌毒力基因aggR質(zhì)粒 DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) | GBW(E)091282 | 2.13×107 | 0.33×107 |
腸道集聚性大腸埃希氏菌毒力基因pic質(zhì)粒 DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) | GBW(E)091283 | 2.35×107 | 0.37×107 |
腸道集聚性大腸埃希氏菌毒力基因astA質(zhì)粒 DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) | GBW(E)091284 | 2.29×107 | 0.36×107 |
產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌 lt基因質(zhì)粒DNA 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) | GBW(E)091285 | 2.10×107 | 0.33×107 |
腸道致病性大腸埃希氏菌escV基因質(zhì)粒DNA 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) | GBW(E)091286 | 2.10×107 | 0.33×107 |
產(chǎn)志賀毒素大腸埃希氏菌stx2基因質(zhì)粒DNA 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) | GBW(E)091287 | 2.07×107 | 0.32×107 |
豬源性ATP8基因DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) | GBW(E)091288 | 1.37×108 | 0.22×108 |
黃牛源性cytb基因DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) | GBW(E)091289 | 1.55×107 | 0.24×107 |
牦牛源性cytb基因DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) | GBW(E)091290 | 1.26×107 | 0.19×107 |
綿羊源性cytb基因DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) | GBW(E)091291 | 2.49×107 | 0.38×107 |
雞源性ND1基因DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) | GBW(E)091292 | 6.62×107 | 1.05×107 |
鴨源性cytb基因DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) | GBW(E)091293 | 3.15×107 | 0.48×107 |
鵝源性16S rRNA基因DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) | GBW(E)091294 | 5.17×107 | 0.80×107 |
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